簡(jiǎn)要描述:BTX ECM 399電穿孔儀適用于動(dòng)植物、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物、人類細(xì)胞(包括活體細(xì)胞)的轉(zhuǎn)基因等操作,操作方法可參照相關(guān)文獻(xiàn),及向廠商索要。ECM399轉(zhuǎn)基因儀主要用于哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)染、細(xì)菌酶轉(zhuǎn)化,具有脈沖長(zhǎng)、磁場(chǎng)強(qiáng)為其特點(diǎn)。
BTX ECM 399電穿孔儀
適用于動(dòng)植物、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物、人類細(xì)胞(包括活體細(xì)胞)的轉(zhuǎn)基因等操作,操作方法可參照相關(guān)文獻(xiàn),及向廠商索要。ECM399轉(zhuǎn)基因儀主要用于哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)染、細(xì)菌酶轉(zhuǎn)化,具有脈沖長(zhǎng)、磁場(chǎng)強(qiáng)為其特點(diǎn)。
BTX ECM 399電穿孔儀應(yīng)用舉例
高壓型用于:DNA或誘變等大腸桿菌結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)基因
低壓型用于轉(zhuǎn)染、淋巴、髓膠質(zhì)成纖維和COS-7細(xì)胞
無論任何一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞均可選擇不同的電壓和脈沖范圍,并且脈沖可隨時(shí)調(diào)整
細(xì)菌/酵母轉(zhuǎn)化(系統(tǒng):ECM399/630)
電穿孔現(xiàn)在被認(rèn)作是轉(zhuǎn)化細(xì)菌及酵母的的方法。革蘭氏陰性細(xì)菌(例如大腸桿菌)一般比革蘭氏陽性細(xì)菌更容易轉(zhuǎn)化,因?yàn)樗麄兊募?xì)胞壁組成不同。對(duì)于革蘭氏陰性細(xì)菌常??梢垣@得10的10次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA的轉(zhuǎn)化效率,而對(duì)于革蘭氏陽性細(xì)菌,一般可以得到10的6次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA。Chang等人(1997)成功對(duì)一個(gè)mtz-敏感的Heliobacterpylori菌株進(jìn)行電穿孔以傳遞mtz抵抗性。Planelles等人(1999)使用電穿孔轉(zhuǎn)化大腸桿菌,以避免使用包裝物質(zhì)。最近電穿孔儀器方面的進(jìn)展將使研究人員能夠進(jìn)一步優(yōu)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化(例如脈沖長(zhǎng)度產(chǎn)生方面擴(kuò)展的功能條件)。
RNA、DNA、蛋白質(zhì)以及小分子都已經(jīng)通過電穿孔的方法轉(zhuǎn)入酵母。沒有必要在電穿孔前部分去除酵母細(xì)胞壁,因?yàn)樵谕暾湍鸽姶┛追矫娴倪M(jìn)展可以產(chǎn)生高的轉(zhuǎn)化率。Faber等人(1994)年優(yōu)化了S.Cerevisiae的實(shí)驗(yàn)方案,使用HansenulaPolymorpha獲得了比以前的報(bào)告增加300倍的轉(zhuǎn)化效率。
在質(zhì)粒修復(fù)中,質(zhì)粒從酵母轉(zhuǎn)入大腸桿菌以進(jìn)行詳細(xì)的DNA序列分析,這是另外一種重要的技術(shù)。這種兩個(gè)步驟的過程被電穿孔進(jìn)行了簡(jiǎn)化,用于驗(yàn)證隱性基因的結(jié)構(gòu),將其導(dǎo)入酵母,看基因性和表現(xiàn)性之間的關(guān)系。已經(jīng)建立了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方案使用指數(shù)衰減波發(fā)生器例如BTXECM630轉(zhuǎn)化細(xì)菌/酵母。使用方形波電穿孔儀的實(shí)驗(yàn)方案,例如BTXECM830,來轉(zhuǎn)化細(xì)菌/酵母。研究人員還成功將大的質(zhì)粒(BAC及YAC)導(dǎo)入細(xì)菌。電穿孔杯是細(xì)胞及酵母電穿孔的附件,而Model747共軸電極使用則變得越來越普遍。
BTX ECM 399電穿孔儀技術(shù)參數(shù)
高壓模式 | 電壓 | 10-2500V,10V調(diào)進(jìn) |
電阻 | 150Ω | |
電容 | 36μF | |
低壓模式 | 電壓 | 2-500V,2V調(diào)進(jìn) |
電阻 | 151Ω | |
電容 | 1050μF |
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